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武汉优博河豚毒素检测试剂盒技术详解 达国际一流水平
点击次数:405 发布日期:2018-4-8  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
武汉优博生物技术有限公司开发的河豚毒素ELISA检测试剂盒,检测限量达到2 ppb,在美国、日本、俄罗斯、北欧等食品企业、政府检验机构广为应用,质量合格率达到100%,误差1%左右,大量的实验数据标明,河豚毒素检测试剂盒技术水平国际一流水平。
 
LC-MS仪器对比试验,结果符合率100%,批间差异小于0.1%,试剂盒稳定高,抗干扰力强。

1.  ELISA标准工作曲线

按照竞争性ELISA操作过程,对不同稀释度的河豚毒素标准液进行测定,以各孔平均OD值与对照组的OD值比值的logit函数为纵坐标,以不同浓度河豚毒素标准品浓度的对数为横坐标,绘制出标准曲线。结果如图所示:线性回归方程为y-1.9695x3.3899R²=0.9902线性范围为5-500 ng/mL,最低检测限为5 ng/mL
 
1  ELISA标准工作曲线(纵坐标不是抵制率logit(B/B0)
    

2.  回收率实验

添加250 ng500 ng的河豚毒素标准品的1 g河豚鱼鱼肉中,通过竞争ELISA检测结果如表所示:添加250 ng标准品时,回收率为159%,添加500 ng标准品时,回收率为108%。产品回收率偏高,我们分析可能是由于洗板次数太多,导致少量的抗体抗原脱离,或者是由于实验时间偏长,抗体的效价减弱引起。产品回收率偏高,不影响检测灵敏度,由于产品检测限较低(5 ng/mL),所以该产品可以满足日常对河豚鱼的检测工作要求。
2模拟样品回收率实验
样品
0
250ng
500ng
河豚鱼肉
ND
398ng
542.5ng
回收率%
-
159%
108%
CV%
3.7
4.3
6.2
 

3. 稳定性实验

对浓度为1050100150 ng/mL的标准品进行检测,结果如表所示:10-150 ng/mL 4个标准品浓度变异系数为1.93-3.77%平均变异系数为2.76%。   
 
变异系数CV %=(标准偏差SD /平均值Mean)×100%
3 稳定性
添加 河豚毒素 标准品理论浓度(ng/mL)
溶液中TT含量(ng/mL)
10
50
100
150
1
15.43
60.17
124.80
167.18
2
12.38
57.51
122.02
174.24
3
13.32
54.86
113.49
152.26
4
12.55
56.80
117.83
167.03
5
15.48
57.00
111.84
157.33
6
12.49
60.14
116.74
164.63
平均
13.61
57.75
117.79
163.78
CV%
1.93
3.77
2.38
2.97
 

4. 样品中河豚毒素的检测

4  浙江与海南省河豚鱼不同品种不同部位毒素分布情况         
样品浓度Xμg/kg
       
 
  品种
1#
2#
3#
4#
5#
6#
7#
8#
月腹刺鲀
ND
ND
ND
ND
60.56
ND
47.40
ND
293.83
ND
ND
ND
ND
1.33
30.09
0.57
ND
623.69
ND
ND
ND
ND
41.30
89.63
22.46
ND
1034.34
ND
ND
ND
ND
15.89
13.61
89.57
24.34
275.70
ND
ND
ND
ND
5.72
114.02
102.93
107.4
970.70
ND
ND
0.875
ND
5.56
43.91
52.83
ND
636.39
ND
ND
ND
ND
5.35
49.37
67.16
20.77
97.75
ND
ND
ND
ND
2.14
6.75
87.55
0.87
312.36
ND
ND
ND
ND
133.93
51.43
ND
20.73
176.74
ND
ND
ND
ND
11.57
81.78
50.19
35.67
254.21
ND
ND
ND
ND
48.30
7.57
54.78
8.25
197.55
ND
ND
ND
ND
2.56
ND
87.73
20.29
N
ND
ND
ND
ND
ND
113.30
50.89
3
46.7
ND
ND
ND
ND
ND
15.86
39.54
ND
45.75
ND
ND
ND
ND
ND
ND
20.09
20.09
59.27
性腺
ND
5.96
ND
ND
ND
ND
32.58
12.5
399.82
 
方法依据:GBT 5009.206-2007 鲜河豚鱼中河豚毒素的测定  
 
计算公式:XC×D×V/m
         X:样品中河豚毒素含量,单位为微克每千克(μg/kg)
         C:酶标板上测的河豚毒素含量,单位为纳克每毫升(ng/mL
         D:样品稀释倍数
         V:提取溶液的定容体积,单位为毫升(mL
         m:检测样品的质量,单位为克(g)   
 
关于河豚鱼的毒性,一般分为4个毒力等级:毒性高于1000 MU/g为剧毒级;介于100 MU/g1000 MU/g之间为强毒级;介于10 MU/g100 MU/g之间为弱毒级;低于10 MU/g为无毒级(无毒级中使小鼠致死的情况可视为微毒级)。据张理对鼠单位的定义 (1 MU=0.22 μg)
 
根据上述方法绘制标准曲线,并得出回归方程(y=a×x-b)。其中 ab为系数,y为抑制率(A0-A /A0%)xLog(100*河豚毒素浓度)。根据样品的OD490 (A)值计算抑制率,再根据公式计算出河豚毒素的浓度。结果表所示:河豚毒素在浙江与海南省常见河豚鱼的种类分布差异显著,菊黄东方鲀未检测出毒性,属于无毒级别;双斑东方鲀虽有检测出毒性但也属于无毒级别,其中雄性双斑东方鲀的脾脏和胃毒力高于雌性;野生月腹刺鲀的毒力明显高于养殖品种。
来源:武汉优博生物技术有限公司
联系电话:027-87745856
E-mail:info@unibiotest.com

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